Lip2000转染试剂
Lip2000转染试剂
Lipo2000® Transfection Reagent
ZR028
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
Lipo2000® Transfection Reagent | ZR028 | 0.75ml/1.5ml |
产品简介
Lipo2000®是一种新型的阳离子脂质体转染试剂。适合于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，具有低细胞毒性；对多种类型的细胞和培养板都具有高转染效率；转染时血清的存在不影响转染效率的优点。
适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞（哺乳动物细胞系）的转染。
储存与运输
2-4℃保存一年。（避免冷冻）
质粒DNA的转染
对大多数细胞来说，DNA(µg)与Lipo2000 (µl)的比例为1:2~1:3。转染时高的细胞密度可以得到高的转染效率和表达水平，并能减少细胞毒性。
1. 以24孔板为例
贴壁细胞： 转染前一天，用500 µl不含抗生素的培养基接种0.5～2×105细胞，使之第二天能达到70-90%汇合。
悬浮细胞：在准备DNA-Lipo2000复合物之前，用500 µl不含抗生素的培养基接种4～8×105细胞即可。
2. 对每个转染样品，进行以下操作
a. 在eppendorf管里分别加入50 µl Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 µg DNA轻柔混匀，制成DNA稀。
b. 在另一个eppendorf管里分别加入50µl Opti-MEMI ReLipced Serum Medium和2.0 µl Lipo2000(注意用前先混匀，轻柔混匀，制 成Lipo2000 稀释液，室温静置5分钟。
c. 将DNA稀释液和Lipo2000稀释液混合，轻柔混匀，室温静置20分钟， 形成DNA-Lipo2000复合物。DNA-Lipo2000复合物在室温下可稳定存在6小时。
3. 将DNA-Lipo2000复合物加入到接种好的细胞中，将培养板轻轻地前后摇动，使复合物分散均匀。
4. 在37℃ CO2培养箱中培养4-6小时后更换培养基,继续培养18～48小时。
5. 如果要筛选稳定细胞株，则在转染24小时后将细胞按照1:10或更高的比例接种到新鲜培养基中，第二天加 入选择性培养基进行筛选。
质粒DNA转染的优化 为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响，可以对DNA和Lipo2000的比例以及细胞密度进行优化，一 般在1:0.5~1:5的范围内优化DNA (µg)和Lipo2000 (µl) 的比例。
不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及Lipo2000用量
细胞培养板 |
每孔面积 | 培养基用量 | DNA转染 | siRNA | |||
铺板培养基用量 | 稀释培养基用量 | ||||||
96-well | 0.3 cm2 | 100 uL | 2 × 25 µl | 0.2 µg | 0.5 µl | 5 pmol | 0.25 µl |
24-well | 2 cm2 | 500 uL | 2 × 50 µl | 0.8 µg | 2.0 µl | 20 pmol | 1.0 µl |
12-well | 4 cm2 | 1 mL | 2 × 100 µl | 1.6 µg | 4.0 µl | 40 pmol | 2.0 µl |
6-well | 10 cm2 | 2 mL | 2 × 250 µl | 4.0 µg | 10 µl | 100 pmol | 5 µl |
60-mm | 20 cm2 | 5 mL | 2 × 0.5 ml | 8.0 µg | 20 µl | 200 pmol | 10 µl |
10-cm | 60 cm2 | 15 mL | 2 × 1.5 ml | 24 µg | 60 µl | 600 pmol | 30 µl |
常见细胞的转染效率（仅供参考，实验条件不同转染效率会有差别）
细胞种类 | HEK293 | HCT 116 | WRL -68 | HepG2 | NIH/3T3 | THP-1 | Hela | MCF-7 | 293T | TS cell | HO1980 | A549 |
转染效率 | >80% | >80% | ~80% | ~80% | ~80% | >50% | >80% | >80% | >80% | >60% | >60% | >80% |
细胞种类 | MEF | Chok1 | Hep3B | C2C12 | Neuro-2a | HUVEC | MDCK | Hep2C | WEHI | B50 | Calu1 | L929 |
转染效率 | >50% | >50% | >80% | >80% | >70% | >80% | >80% | >80% | >80% | >70% | >70% | >70% |
