尿液外泌体提取试剂盒

尿液外泌体提取试剂盒

EC103-01/02/03

■产品信息：

■产品介绍：

Exosomes Isolation Regents 是用于高效、快速、方便的从尿液中提取 Exosomes 的试剂盒。仅需通过简单操作和常规离心机即可从样本内中获取大量结构完整的 Exosomes。相比传统的超高速离心法，Exosomes Isolation Regent 提取效率更高，更节省时间和样本，提取的 Exosomes 可用于 WB、PCR、qPCR、NGS、细胞功能实验和 Elisa 等实验。

■试剂盒适用范圈：

本试剂盒只适用于尿液的外泌体提取，仅用于科学研究。

■ 保存条件：

请于4℃保存，可稳定保存一年。

■流程介绍：

样品预处理→沉淀外泌体→外泌体重悬。

■ 样品准备：

尿液：

1、收集样品后置于冰上，3000g 离心 20min，除去尿液沉渣和残留细胞；

2、收集上清液，10000g 离心 10min，除去细胞碎片；

3、收集上清液至于 100KD 的超滤管或超滤系统浓缩 2-5 倍。

4、收集上清液提取 Exosomes 或 4°C 保存待用。

■ Exosomes 提取：

1、转移上清液至新离心管中，加入体积比 V 样 : VA=2:1 的 Isolation Regent A；

2、颠倒混匀 3-5 次后于 4°C 静置 5min，然后 10000g 离心 5 min；取上清液转移置新的离心管中，加入等体积的 Isolation Regent B ；

3、颠倒混匀 3-5 次后于 4°C 静置 1h，然后 13500 g 离心 0.5 h，弃去上清液，收集沉淀，此沉淀即为外泌体；

4、根据后续实验加入 500ul 无菌 PBS 重悬沉淀物（或下游实验稀释液），进行后续 实验或分装后-80℃保存。

■常见问题：

Q1：如何鉴定提取的外泌体？

A1：外泌体是体细胞分泌的细胞外囊泡群体中一种，直径一般为 30-150nm，通常确定外泌体一般需要三个验证：透射电镜（TEM）形态观察，颗粒粒径测定（NTA）和蛋白标志物检测（外泌体标志蛋白有 CD9，CD81，CD63，TSG101，Alix 等）

Q2：将 Isolation Reagent 加入到体液样本中后，颠倒混合。请问这一步是否可以用振荡器剧烈震会对效果有影响？

A2：只需将Isolation Reagent与待提取样品混合均匀即可，震荡的强度不宜过分剧烈,剧烈震荡会破坏外泌体结构完整性，影响提取效果。

Q3：提取的外泌体可以用于转录组，代谢组学和蛋白组学研究吗？

A3：试剂盒提取的外泌体可以用于基于核酸的（DNA或RNA）的高通量测序分析，经我们验证30ml的尿液样品提取的外泌体可以满足small RNA测序需求。基于沉淀法开发的外泌体提取试剂盒不能够完全去掉杂蛋白，不建议用来做代谢组学和蛋白组学的研究。

Q4：提取的外泌体可以标记后，用于细胞或者动物实验荧光检测吗？

A4：试剂盒提取的外泌体可以用于细胞和动物实验。建议在进行细胞实验前对有效浓度进行探索性实验，且蛋白质数量或粒子数对外泌体进行定量时也存在误差。同时外泌体的标记方法和荧光浓度也需摸索。

Q5：尿液外泌体提取过程中需要注意的事项有哪些？

A5：在提取尿液的外泌体过程中，前期的样品处理需要重视，建议当天收集的样品当天提取完，尿液中的尿素，氨等会影响样品。其次在取样时需要重视取样的时间，晨尿最优，部分尿液中还会有其他杂质，可以重复样品准备部分的步骤1