细胞周期检测试剂盒(DNA含量检测)
细胞周期检测试剂盒(DNA含量检测)
保存条件
RNase A 溶液适当分装后-5~-20°C 可保存1年。PI染色液(50ug/mL)2~8℃ 避光可保存1年。
检测原理
细胞周期检测试剂盒(DNA 含量检)是通过检测DNA含量来检测细胞周期的试剂盒。本试剂盒可应用于培养细胞(悬浮、贴壁)的 DNA 含量(细胞周期)检测。
细胞周期 (cell cyde) 是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整 个过程。在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。细胞周期可以分为分裂间期 (interphase) 和有丝分裂期(Mphase), 分裂间期又可以细分为休眠期 (G0), DNA 合成前期(G1),DNA合成期 (S),DNA合成后期(G2)。 利用细胞内DNA能够和某些特定荧 光染料(如碘化丙啶-PI) 结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料的量不同，通过流式细胞仪检测荧光强度即可反映细胞周期变化情况。
PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1~2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及DNA片段化(DNA ffagmentation)导致部分基因组DNA片段在染色过程中丢失，因此凋亡细胞在PI染色后呈现明显的弱染，即荧光强度小于1,在流式检测的结果图上出现所谓的sub-G1 峰，即凋亡细胞峰。
实验操作指南
1. 准备工作
A. 无水乙醇-20℃冰箱过夜。
B. RNaseA 溶液溶解后混匀，冰浴备用。
2. 样本处理
1)按实验方案对细胞进行处理后，收集约5×10细胞。
2)300×g 离心5 min, 弃上清。
3)加入1mLPBS洗涤，300×g离心5min, 弃上清。
4)加入0.3 mL的PBS重悬细胞。
3. 加入12mL的-20℃无水乙醇，充分混匀后置于-20°℃冰箱中1h或过夜。
4.300×g 离心5min, 弃上清，加入1mL的PBS重悬细胞，室温放置15 min。
5.300×g 离心5min, 弃上清，加入100μL的RNaseA 溶液并充分悬浮细胞，37℃水浴30min。
6. 加入400μL的PI染色液(50μg/mL) 并充分混匀，2-8°C避光孵育30 min。
7. 立即上机检测，记录激发波长488nm 处红色荧光。
注意事项
1. 保质期1年。为获得最佳的使用效果，请在3-6个月内使用。
2. 实验结果需用流式细胞仪进行检测。
3. 荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光。
4.PI染色液(50μg/mL) 对人体有刺激，操作时请小心，并注意适当防护以免直接接触人体或吸入体内。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
