Sunview®-ECL特超敏发光液

产品简介

Sunview®-ECL底物可为使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联物的免疫印迹实验提供明亮的信号，由于采用了Sunview关键的核心技术基于“荧光震荡”机理设计的发光底物系统。可通HRP实现实现低皮克级和飞克级(以HRP浓度为标准)的免疫印迹检测，其灵敏度，发光时间和背景均明显优于T公司和M公司。该ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。

Sunview®-ECL底物的特点：

• Sunview®-ECL —用于辣根过氧化物酶(HRP)的增强型化学发光底物

• 低皮克级灵敏度—检测硝化纤维素膜或PVDF膜上低皮克级的蛋白条带

• 长信号持续时间— 在条件优化情况下，经底物孵育的印迹条带能够持续输出6至8小时的可检测光信号

• 稳定试剂— 工作液在24小时内保持稳定；试剂盒在室温下可稳定放置长达1年

• 价格经济— 针对稀释的抗体浓度条件进行了优化：

• 0.2至 1.0 µg/mL一抗（以1 µg/mL储存液稀释1:1,000至1:5,000倍）

• 10至 50 ng/mL二抗（以1 µg/mL储存液稀释1:20,000至1:100,000倍）

储存条件及保质期

室温运输，收到后在4℃避光下储存试剂，24个月。

操作概述

  注：优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度，以保证阳性结果。有关建议的稀释度范围请参考其他所需材料。

1) 将一抗浓度稀释到0.2～1ug/ml

2) 将二抗浓度稀释到10～50ng/mL

3) 将两种底物组份按1:1比例混合，制备底物工作液。

注：暴露于日光或任何其他强光可能损害工作液，为获得最佳结果，将此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免长期暴露于任何强光。短时间暴露于实验室常规照明不会损害该工作液。

4) 将印迹膜在Sunview®-ECL底物工作液中孵育5分钟。

5) 吸出多余试剂。用清洁的塑料膜盖住该印迹膜。

6) 使印迹膜在X光胶片上曝光。

 蛋白印迹法详细操作步骤

1) 将印记膜从蛋白转印设备中取出，加入合适的封闭液在温室下孵育20-60分钟，同时振荡。以封闭膜上非特异性蛋白结合位点。请注意：使用在前文建议的抗体稀释度是非常重要的。

2) 将膜从封闭液中取出，与一抗工作液在温室孵育1小时，同时振荡；或在28℃孵育过夜，不振荡。

3) 将足量的洗涤缓冲液加至膜上，保证缓冲液将膜完全覆盖。振荡孵育≥5分钟，更换洗涤缓冲液并重复该步骤4-6次。增加洗涤缓冲液体积，洗涤次数和洗涤时间有助于降低背景信号。

注：孵育前，膜在洗涤缓冲液中的短暂淋洗会提高洗涤效率。

请注意：使用在前文建议的HRP标记二抗稀释度是非常重要的。

 4) 将HRP标记的二抗工作液与膜在温室孵育1小时，同时振荡。

 5) 重复步骤3，以除去未结合的HRP标记二抗。注：膜与HRP标记二抗孵育后必须进行彻底洗涤。

 6) 将A溶液与B液等比例混合，制备成工作液。每cm²膜使用0.01～0.1ml工作液。工作液可以在温室下稳定8小时。注：暴露于日光或任何其他强光下可能损害工作液，为获得嘴角结果，将此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免长期暴露于任何强光。实验室的常见照明不会损害工作液。

7) 将印记膜在工作液中孵育5分钟。

8) 从工作液中取出印记膜，并置于一个塑料片或清洁的塑料纸（膜）中，用一张吸水纸吸除多余的液体，并从印记和塑料纸之间小心地压出气泡。

9) 将包在塑料纸（膜）中的印记膜置于胶片暗盒中，蛋白质面朝上，除适用于胶片曝光的灯（如红色安全灯）之外，关闭所有的灯。

注;胶片必须在曝光期间保持干燥，为获得最佳效果，才去一下措施：

*   确保将多余的底物从膜和塑料纸上完全去除。

*   在整个胶片处理期间，使用手套。

*   切莫将印记膜置于已显影的胶片上，因为胶片上的化学物质会减弱信号。

10) 将X光胶片置于膜的上面。建议第一次曝光60秒。之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前5-30分钟期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时，但强度会随时间下降，如有底物孵育后较长时间后曝光，曝光时间可能需要延长以获得较强信号。如果使用磷光存储成像设备（如Bio-Rad的分子成像仪系统）或CCD照相机可能需要较长的曝光时间。

    警告：胶片与膜之间的任何移动可能在胶片上造成人为的非特异信号。

11) 使用合适的显影剂和定影剂对胶片进行显影。如果信号太强，则缩短曝光时间或将印记膜进行剥离并降低抗体浓度重新检测。